概述
MabPurix P30和MabPurix P45亲和填料以单分散多孔型聚甲基丙烯酸酯为基质,粒径分别为30 μm和45 μm,通过赛分科技的独特技术将聚合物基质与耐碱性重组Protein A配基键合,专门用于单克隆抗体和含有Fc片段的重组蛋白类生物大分子的分离纯化。填料表面经过专有技术的处理,具有更好的亲水性,最大程度地避免了与生物样品的非特异性吸附。
填料结构
图1.MabPurix P30亲和填料结构示意图
填料特性
& 高载量
& 良好的耐碱性(0.5 M NaOH)
& 高亲水性,可忽略的非特异性吸附
& 常规装柱条件下,体积变化小
& 良好的耐压性能
& 产品供应能力:>100 L
技术参数
填料类型
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MabPurix P30
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MabPurix P45
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基质
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聚甲基丙烯酸酯
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粒径
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30 μm
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45 μm
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配基
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耐碱性重组Protein A
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动态载量
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50 mg hIgG/mL
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50 mg hIgG/mL
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操作压力
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1 MPa
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pH范围
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1-13
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耐碱性
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0.5 M NaOH
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CIP
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0.5 M NaOH
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1.动态载量(DBC)测试条件:以2.0 mg/mL Human IgG in 20 mM Na-phosphate+150 mM NaCl, pH 7.4为样品,使用6.6 mm*30 mm层析柱,流速为0.257 mL/min (4 min 驻留时间),载量以10%流穿计。
2. 耐碱性测试条件:接触25 h, DBC > 80%。
图2.MabPurix P30 基球的电镜扫描图像
图3. MabPurix P45微球电镜扫描图像
图4. MabPurix P45 基球的粒径分布
性能特点
(1)均一的粒径分布:微球高度交联、表面光滑、高度球形。粒径30 μm与45 μm,且分布较窄, D90/D10<1.3。均一的粒径产生更稳定的柱床,节省填装色谱柱的时间。
(2)更快的蛋白传质:在1.5 - 6 min驻留时间内,动态载量的变化小。实际使用中,在同样的柱子尺寸和填料体积下,可缩减生物样品生产下游纯化的时间,提高生产效率。
(3)更快的操作流速:相比于传统的琼脂糖基质,采用聚甲基丙烯酸酯基质可以提高填料的耐压性能,能够在更快的流速下实现样品纯化(或者可以装更长的柱子,可以批次处理更多的生物样品),节省宝贵时间,提高生产效率。对于不稳定的生物样品(要求快速分离纯化母液),在提高生产效率的同时可以提高产品的收率和质量控制。
图5. MabPurix P30和MabPurix P45压力相对流速曲线
图6. MabPurix P30和MabPurix P45动态载量和驻留时间关系
层析柱:Generik 6.6 mm*30 mm 检测器:280 nm
样品:20 mM Na-phosphate,150 mM NaCl, pH 7.4 + 2.0 mg/mL Human IgG
平衡缓冲液:20 mM Na-phosphate,150 mM NaCl, pH 7.4
洗脱缓冲液:100 mM Gly-HCl, pH 3.0
流速:0.513 mL/min (2 min), 0.342 mL/min (3 min),
0.257 mL/min (4 min), 0.205 mL/min (5 min)
图7. MabPurix P30亲和填料耐0.5 M NaOH CIP性能
层析柱:Generik 6.6 mm*30 mm
每次CIP流程:
1) 20 mM Na-phosphate+150 mM NaCl, pH 7.4, 15 min;
2) 0.5 M NaOH, 15 min;
3) 20 mM Na-phosphate+150 mM NaCl, pH 7.4, 15 min;
4) 0.1 M Na-citrate, pH 3.0, 15 min;
5) 20 mM Na-phosphate+150 mM NaCl, pH 7.4, 15 min
流速:0.5 mL/min
在开始及每10次0.5 M NaOH CIP后测试动态载量(以10%流穿计):
样品:20 mM Na-phosphate,150 mM NaCl, pH 7.4 + 2.0 mg/mL Human IgG
平衡缓冲液:20 mM Na-phosphate,150 mM NaCl, pH 7.4
洗脱缓冲液:0.1 M Na-citrate, pH 3.0
流速:0.257 mL/min(4 min驻留时间)
单克隆抗体纯化应用
图8. MabPurix P30亲和填料纯化单克隆抗体应用图8. MabPurix P30亲和填料纯化单克隆抗体应用
层析柱:15 mm*150 mm column
样品:144.3 ml抗体发酵液,浓度为2.84 mg/mL
平衡:20 mM Na-phosphate,150 mM NaCl, pH7.4
上样:4.123 mL/min (3 min residence time), 35 min
清洗1:20 mM Na-phosphate,150 mM NaCl, pH7.4
清洗2:20 mM Na-phosphate, 2.0 M NaCl, pH6.0
洗脱:100 mM Gly-HCl, pH3.0 (加28.9 mL 1 M Tris-HCl,共收集144 mL)
CIP:0.5 M NaOH,15 min
再平衡: 20 mM Na-phosphate,150 mM NaCl, pH7.4
平衡/清洗/洗脱/CIP/再平衡流速:5.0 mL/min
图9. MabPurix P30亲和填料纯化单克隆抗体效果
色谱柱: Zenix SEC-300 (4.6×300 mm)
流动相: 150 mM Sodium phosphate buffer, pH7.0
流速: 0.35 mL/min
进样量: 10 μL
检测波长 : 280 nm
产品名称
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粒径(µm)
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订货号
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MabPurix P30
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30
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270830990
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MabPurix P45
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45
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270845990
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包装规格为0.5, 1, 5, 10, 100 L,预装柱规格为1, 5 mL,也可根据客户的需要提供其它规格的产品和预装柱。